使用ViraPower™慢病毒表达系统，第一次实现在不分裂的哺乳动物细胞中进行稳定的高水平基因表达了。现在您可以将您的基因重复地转至分裂或非分裂细胞的全部群体，提高了研究基因表达的能力。ViraPower™慢病毒表达系统助您把握哺乳动物基因表达的强大威力。

强大的表达

对于几种常用的哺乳动物细胞类型，常规的转染或病毒转导得到的基因表达水平不足以获得有效结果。对这些以前比较困难的基因表达实验，如果使用ViraPower™慢病毒表达系统就很容易进行。不管您正使用难于转染的哺乳动物细胞系，还是只想促进基因导入效率，ViraPower™慢病毒表达系统提供稳定的基因表达，且对分裂及非分裂细胞进行可重复的基因导入。腺病毒和传统的逆转录病毒系统都不能在一个系统中同时提供这两种强大的基因表达选择。

工作机理

使用ViraPower™慢病毒表达系统，仅需几个步骤就可以获得稳定的高水平表达（图1）。首先，将ViraPower™ Packaging Mix（经优化的包含三种包装质粒的混合物）和包含目的基因的pLenti6/V5表达载体共转染到293FT™ producer细胞中。转染后，收集上清，其中包含了已包装入病毒颗粒的目的基因。在收获和滴度鉴定后，将病毒上清加入任何培养的哺乳动物细胞或原代细胞系中，就可以进行基因表达了。或者，您也可以将病毒上清保存长达一年。为安全起见，病毒仅可以产生一次转导细胞，不会产生感染的继代细胞。

存至一年 转染哺乳动物细胞，筛选稳定表达并分析。 构建包含目的基因的pLenti6/V5™表达载体。   使用构建的pLenti6/V5™表达载体和优化的ViraPower™包装混合液共转染293FT™ producer细胞系。   收集病毒上清和鉴定滴度。

高速灵活的克隆

根据您的方便，现在有两种pLenti6/V5™表达载体可供选择，如果您想通过重组在不同的表达载体或系统间进行转换，可以选择使用了GateWay™技术的pLenti6/V5-DEST™载体；对于PCR产物克隆，可以选择pLenti6/V5-TOPO®载体，在5分钟内将目的基因TOPO®克隆到载体中。载体可以单独购买或做为ViraPower™ Lentiviral GateWay™或Directional TOPO® Expression试剂盒的一个组分获得。除了几个重要的安全特性，两种载体都含有：

* CMV启动子，可以高水平表达。 * C-端V5标签，可以方便地检测重组蛋白。 * 杀稻瘟素抗性基因，可以进行快速有效的稳定筛选。 * 包装信号，可以将来自目的基因的RNA高效地包装到病毒颗粒中。

增加表达的选择性

传统的基于MLV的逆转录病毒系统需要一轮宿主细胞的分裂以进入细胞核，并整合到宿主基因组上。使用ViraPower™慢病毒系统，目的基因可以有效地输入到细胞核，高效整合并稳定表达（图2）。第一次，您可以把目的基因转染并稳定整合到非分裂细胞中（图3）。这样，您的潜在转染对象就扩展到生长或药物阻滞的细胞，非分裂的原代细胞及神经元细胞。

图2 使用pLenti6/V5™载体的高效长期表达   图3 慢病毒转染人原代成纤维细胞   转染后10天   传统逆转录病毒载体   转染后6周   pLenti6/V5-GW/lacZ™慢病毒载体 使用pLenti6/V5-GW/lacZ™慢病毒表达载体转染HT10890细胞，使用10μg/ml杀稻瘟素进行稳定筛选。在转染后10天和6周将培养物染色，检测β-半乳糖苷酶的表达。   使用逆转录病毒和慢病毒载体，在MOI为1时转染经contact抑制休眠的非分裂人原代包皮成纤维细胞，转染48小时后染色，检测β-半乳糖苷酶活性

每个细胞中的表达

病毒转导的独特性在于，其可以通过选定每细胞中注入的病毒数目（MOI）而可重复地调整结果。1个MOI定义为加入到细胞中的病毒颗粒数，即理论上一个细胞中转入一个病毒颗粒。MOI值和基因导入及表达直接相关（图4）。通过改变MOI值，您可以有效地调整每个细胞中整合基因数，从而调节基因表达的水平。

图4 基因表达同感染复数（MOI）直接相关 使用pLenti6/V5-GW/lacZ™病毒，在感染复数（MOI）分别为0.05，0.1，0.5和1时重复转染HT1080细胞。48小时后收获细胞，检测β-半乳糖苷酶活性。

内置的安全特性

为了保护，ViraPower™慢病毒表达系统拥有多个关键的内置安全特性，包括：

* 以反式（in trans）方式提供HIV的包装功能，避免非预期的重组。在ViraPower™ Packaging Mix中不含LTR，所以包装载体不会包装成病毒颗粒。 * 此系统中产生的病毒颗粒不能复制，只能用来装载目的基因，不会产生其他的病毒颗粒。 * 慢病毒载体经过修饰，已被自灭活；当转染和整合后不能在产生可包装的病毒基因组。 * ViraPower™慢病毒表达系统安全去除了野生型病毒，可以安全使用。

完全去除了野生型病毒，可以安全使用。

使用ViraPower™获取结果

对以前难以转染的细胞类型也可以得到强大的表达，得到您期待已久的结果。请立刻致电订购ViraPower™慢病毒表达试剂盒。

产 品 包 装 货 号 价格 $ ViraPower™ Lentiviral Directional TOPO® Expression Kit 1 Kit K4950-00 1460.00 ViraPower™ Lentiviral Gateway™ Expression Kit 1 Kit K4960-00 1460.00 pLenti6/V5™ Directional TOPO® Cloning Kit 1 Kit K4955-10 1194.00 pLenti6/V5-DEST™ Gateway™ Vector Pack 6µg V496-10 1194.00 ViraPower™ Lentiviral Support Kit 20 rxns K4970-00 747.00 293FT Cells 3 ×10^6 cells R700-00 287.00