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问题
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原因
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解决办法
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DNA带模糊
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DNA降解
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避免核酸酶污染
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电泳缓冲液陈旧
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电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液
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所用电泳条件不合适
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电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,
温度应<15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力
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DNA上样量过多
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减少凝胶中DNA上样量
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DNA样含盐过高
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电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐
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有蛋白污染
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电泳前酚抽提去除蛋白
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DNA变性
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电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA
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不规则DNA带迁移
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对于λ/Hind III片段cos位点复性
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电泳前于65℃加热DNA 5分钟,然后在冰上冷却5分钟
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电泳条件不合适
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电泳电压不超过20V/cm;温度<30℃;经常更换电泳缓冲液
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DNA变性
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以20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳前勿加热
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带弱或无DNA带
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DNA的上样量不够
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增加DNA的上样量;聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳
灵敏度稍高,上样量可适当降低
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DNA降解
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避免DNA的核酸酶污染
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DNA走出凝胶
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缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
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对于EB染色的DNA,所用光源不合适
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应用短波长(254nm)的紫外光源
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DNA带缺失
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小DNA带走出凝胶
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缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
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分子大小相近的DNA带不易分辨
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增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度
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DNA 变性
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电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA
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DNA链巨大
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常规凝胶电泳不合适 在脉冲凝胶电泳上分析
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