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DNA电泳常见问题分析
来源:丁香园 作者:未知 发布时间:2006-08-22

问题
原因
解决办法
DNA带模糊
 DNA降解
避免核酸酶污染
电泳缓冲液陈旧
 
电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液
所用电泳条件不合适
电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,
温度应<15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力
DNA上样量过多
减少凝胶中DNA上样量
DNA样含盐过高
电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐
有蛋白污染
电泳前酚抽提去除蛋白
DNA变性
电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA
不规则DNA带迁移
对于λ/Hind III片段cos位点复性
电泳前于65℃加热DNA 5分钟,然后在冰上冷却5分钟
电泳条件不合适
电泳电压不超过20V/cm;温度<30℃;经常更换电泳缓冲液
DNA变性
以20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳前勿加热
带弱或无DNA带
DNA的上样量不够
增加DNA的上样量;聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳
灵敏度稍高,上样量可适当降低
DNA降解
避免DNA的核酸酶污染
DNA走出凝胶
缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
对于EB染色的DNA,所用光源不合适
应用短波长(254nm)的紫外光源
DNA带缺失
小DNA带走出凝胶
缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
分子大小相近的DNA带不易分辨
增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度
DNA 变性
电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA
DNA链巨大
常规凝胶电泳不合适   在脉冲凝胶电泳上分析

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