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SYPRO Orange使用方法 |
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来源：互联网 作者：未知 发布时间：2006-09-04
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SYPRO Orange简介
用SYPRO Orange进行凝胶中蛋白质染色，具有操作简单、快速、灵敏等特点。
SYPRO Orange使用方法
1. 电泳：按照常规方法进行SDS-PAGE电泳。为了提高检测的灵敏度，电泳缓冲液 中的SDS的浓度最好为0.05%（常规浓度为0.1%）。
2. 配制染色液：用7.5%（V/V）的乙酸溶液，按照5000：1的比例稀释SYPRO Orange浓缩液，混匀，制成染色溶液，。
3. 染色：将染色溶液倒入合适的塑料容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-60分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定（一般厚度1mm、15%的凝胶，染色40-60分钟）。
4. 冲洗、观测：用7.5%（V/V）的乙酸溶液短盏冲洗（时间不要超过1分钟），去除凝胶表面染料，用蓝盾观测。
注意
⒈染色溶液可重复使用4次，但使用2次后会降低灵敏度。
⒉不要使用含甲醇的溶液固定蛋白质，甲醇会去除覆盖在蛋白质上的SDS，从而降低SYPRO Orange荧光信号。
⒊超过0.1%的Triton X-100 会影响at 0.1% SYPRO Orange染色，如果在凝胶中使用了超过0.1%的Triton X-100，应用合适的溶液浸泡凝胶，稀释Triton X-100。然后在0.05%的溶液浸泡30分钟后进行染色。
⒋SYPRO Orange不适合在2D PAGE和IEF中对蛋白质进行染色，在这些应用中可使用SYPRO Ruby进行蛋白质染色。
⒌按照以上程序，可以用SYPRO Orange的水溶液进行普通聚丙烯酰胺电泳的蛋白质染色，但灵敏度可能会降低。
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