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小牛肠碱性磷酸酶(CIP) (Alkaline Phosphatase, Calf Intestinal (CIP) ) |
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| #M0290V |
500 Units |
310.00 元 |
| #M0290S |
1,000 Units |
696.00 元 |
| #M0290L |
5,000 Units |
2,784.00 元 |
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· 切除DNA, RNA, rNTPs及dNTPs的5′末端磷酸基团 · 防止克隆载体的自环化连接 · 蛋白质丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的去磷酸化 · 随酶提供10X Reaction Buffer
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产品说明:碱性磷酸酶能催化除去DNA、RNA、三磷酸核糖核苷和三磷酸脱氧核糖核苷的5′磷酸基团。由于CIP处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5′磷酸末端,因此它们不能进行自连接(1)。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。
来源:小牛肠粘膜。
应用: · 除去核酸3′或5′末端的磷酸基团 · 为5′末端标记准备模板 · 防止DNA片段的自连接 · 蛋白质的去磷酸化
反应条件: 1X NEBuffer 3 [100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT (pH 7.9 @ 25°C)]。
另外,CIP在NEBuffers 2、NEBuffers 4 以及EcoR I和BamH I的反应Buffer中也有活性。
CIP去磷酸化步骤: 1. 将DNA溶在1X NEBuffer (0.5 μg/10 μl)中。 2. 每μg载体DNA加0.5单位的酶。 3. 37°C温育60 分钟。 4. 通过胶回收、柱离心或酚抽提方法纯化DNA。
质量保证: CIP 由New England Biolabs的芬兰分公司 Finnzymes Oy 所纯化,不含核酸外切酶、核酸内切酶或RNA酶,质量控制检测在Finnzymes Oy公司进行,并经New England Biolabs认证。
单位定义:在1 ml反应体系中,37°C、1分钟催化1 μmol的对-硝基酚磷酸(pNPP)水解成对硝基酚(pNP)所需的酶量定义为一个活力单位(2)。
活性检测条件: 1 M 乙二胺(pH 9.8),0.5 mM MgCl2,10 mM 对-硝基酚磷酸和适量的酶(这些条件仅用于定量检测酶活力)。
浓度: 10,000 units/ml。
贮存条件: 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM MgCl2, 0.1 mM ZnCl2 和50%甘油,-20°C 贮存。
热失活条件: 无
参考文献: 1. Sambrook, J., Fritsch, E. F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2nd ed.), (p. 5.72). Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 2. Mossner, E., Boll, M. and Pfleiderer, G. (1980) Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 361, 543-549.
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