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CTAB法提取植物DNA |
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来源：互联网 作者：未知 发布时间：2006-09-12
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CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法，
其原理是：采用机械破碎植物细胞，然后加入CTAB分离缓冲液将DNA溶解出来，再经氯仿－异戊醇抽提除去蛋白质，最后得到DNA。
CTAB法的版本有很多，不过大同小异。以下是我使用的方法：
1.将植物组织洗净，用75％的酒精表面消毒4-5min，用去离子水冲洗3次；
2. 将样品放在灭过菌的研钵中，加入液氮捣碎，迅速转入1.5ml离心管中，加入600mlCTAB（或同时加入石英砂和CTAB研磨，然 后转入1.5ml离心管中）；
3. 65℃水浴1h（每20min反转摇匀一次）；
4. 加等体积的氯仿－异戊醇（体积比24：1），或加入苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀；
5. 6500rpm离心30min，取上清于新管中；
6. 重复4，5步骤；
7. 向上清中加入2倍体积的无水乙醇（或2/3体积的异丙醇）沉淀DNA，-20℃放置20min或更长时间，或过夜；
9. 加75％的乙醇清洗DNA，每次12000rpm 2min，去上清；
10. 风干后加入40ul的TE缓冲液溶解DNA；
11. 取2ul溶液电泳检测。
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