原理

免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。

材料与试剂

1．马脾铁蛋白

2．硫酸铵

3．硫酸镉

4．双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante XC)以0.30Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将XC配制成1%溶液。注意配制的水及容器必须特别清洁，配制后放置4℃数天，以不出现沉淀为准。如出现沉淀XC的多聚体形成，应重配。

5．0.30Mol/L pH 9.5硼盐酸缓冲液

6．0.1Mol/L硫酸铵液

7．0.05Mol/L pH 7.4 PBS液

操作方法

1．铁蛋白的提取

⑴ 配制2%硫酸铵液，并以1Mol/L的NaOH或HCl调pH值，正好为5.85。取1g铁蛋白溶于100ml的2%硫酸铵液中。

⑵ 加入20%硫酸镉，使最终浓度为5%，混匀，4℃过夜。

⑶ 1 500g离心(4℃)2h，去上清。仍加2%硫酸铵至100ml，混匀，离心，去除不纯沉渣。

⑷ 于上清液中重新加入20%硫酸镉，重复步骤⑵，离心，去上清。

⑸ 检查沉渣，置显微镜下检查，应具有典型的黄褐色结晶，结晶为六角形，双一四点结构，如结晶不典型，应继续重复以上步骤。

⑹ 以少量的蒸馏水溶解，再加50%饱和硫酸铵溶液，使之沉淀，离心，去上清。

⑺ 重复步骤⑹一次。

⑻ 以少量蒸馏水溶解,常水透析24h后,以0.05Mol/L pH 7.5PBS透析24h。

⑼ 100 000r/min离心2h，去除上部无色上清液(约3/4总量)，置4℃过夜。

⑽ 用微孔滤膜(孔径0.45μ)过滤，使铁蛋白含量为65mg/ml～75mg/ml，分装，4℃保存不要冻干保存,以免铁蛋白结构遭破坏。

2．铁蛋白－抗体交联法

⑴ 以0.3Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将铁蛋白稀释成20mg/ml～25mg/ml。

⑵ 以1