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非标记抗体免疫电镜技术
来源:互联网 作者:未知 发布时间:2006-09-24

(一) 原理
标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素,通过一系统的非标记抗体的免疫学反应,对组织中的抗原进行定位检测。不标记抗体法又可分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。前者利用基因工程方法制备双特异性抗体的F(ab′)2,一个Fab片段与标本中的抗原结合,一个Fab是抗体蛋白的结合片段。在抗体与标本作用后,再加入铁蛋白与抗体结合,从而显示组织内抗原的所在部位。后者则用磷酸钨负染后,直接电镜观察。
(二)材料及试剂
1.待检病毒材料 如粪便,气管分泌物、脑脊髓液、组织培养液等。
2.高速离心机
3.已知抗体
4.磷钨酸
5.琼脂糖
6.其它
(三)操作方法
1.经典法
(1)将被检病毒材料0.9ml,加1

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