|
1.扩增未知的HSV基因
HSV-117syn+株的基因组的DNA序列已经测出，但HSV-1的其它毒株及HSV-2毒株基因组的大部分序列尚未作出，利用HSV-1之间及HSV-1和HSV-2之间在DNA序列上高度同源的原理，根据HSV-117syn+毒株DNA序列设计和合成引物，可扩增出HSV-1毒株和HSV-2毒株DNA中相应的片段，克隆和测序发现新的HSV基因.
2.HSV基因克隆和表达
HSV共编码70个各异的蛋白质，这些蛋白质有些可以诱生高保护作用的中和抗体，刺激细胞免疫，激活NK细胞活性，在免疫保护中起着重要作用，可作为亚单位疫苗应用，PCR扩增出HSV基因，再克隆入原核或真核表达载体中进行表达，作为基因工程疫苗或DNA疫苗.
3.构建重组HSV毒株.
HSVUL23基因为胸苷激酶(TK)基因，具有完整TK基因的HSV既可感染分裂细胞，也可感染非分裂细胞.而TK基因部分或全部缺失的HSV只感染分裂细胞，尤其是神经系统的肿瘤细胞如神经胶质瘤细胞等，利用TK-的HSV在体内，体外杀伤神经胶质瘤的研究已进行了的深入探讨，并取得了令人瞩目的成就.用PCR扩增出HSVTK基因，再用内引物分段扩增TK基因，舍去其中的部分片段，将其余片段相连接后，克隆入转化质粒中，采用活细胞拯救技术，用转化质粒转化HSVDNA，筛选重组的TK-HSV进行研究.用同样的方法可以构建HSV其它基因缺失株或HSV-1/HSV-2重组株.
4.研究HSV基因结构与功能关系
PCR扩增和克隆HSV基因后，用点突变或饱和突变技术突变HSV基因DNA序列，构建突变株DNA或cDNA文库，筛选出功能与亲本株功能有异的突变株，以此研究基因结构与功能的关系.
共3页: 上一页 [1] [2] 3 下一页 |
收藏
推荐
评论(0条)
