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在检验医学领域要正确认识和使用PCR
来源:互联网 作者:未知 发布时间:2006-10-18
  PCR对分子生物学,甚至在整个生命科学领域有极其重要的,划时代的推动作用。关于价值和意义是无庸置疑的。1989年DNA聚合酶被《Science》杂志评为年度风云分子,PCR被列为年度最重要发明,1993年并因此获得诺贝尔奖。
  PCR的地位如此高,不仅仅在于他的高灵敏度,更重要的,它还是获取靶分子的重要手段。因此,它在生命科研上有着至高的地位。长期以来PCR做为一种高灵敏的检测为大家所熟知,但是就检验医学领域而言,这个高灵敏度要正确认识。PCR高灵敏,是因为他把一些原来不可能检验的项目变成了可能。记住,只是可能。做过科研的都知道,PCR能得到所需靶分子的结果,但做PCR是不可能每次成功的。几乎所有的PCR成果都是多次实验反复的结果。而在临床检验中,这种么复却是不可能的。PCR的高灵敏度强调的是可能性,而检验工作最重要的是稳定性,两者是有区别的。
  从检验医学的角度而言,PCR不是一个现想的检验技术。
  首先,从整个检验流程而言,PCR可以说不是一个高灵敏度的技术,反而灵敏度较低。理论上PCR只要存在一个靶序列都是扩增出很多,但为获得靶序列的抽提过程却是一个巨不灵敏的过程,所以PCR很难讲是一项高灵敏度的检测技术。
  其次,正如在《PCR假阴性总结》所说的PCR受影响的因素太多,酶的效率也很难控制,就定量而言其稳定性比较差,所以现在公认的bDNA)。非扩增杂交信号发大避免了扩增效率不稳带来的巨大误差,结果较好。但也不可避免的有灵敏度受限的问题。
  最后,由于PCR高灵敏度的可能性,引起污染假阳性以及没目的性假阳性的机率是存在的。所以对于PCR的使用也有相当大的局限。
  那么PCR在检验医学中是不是就没有使用价值呢?现在有两种观点,有的狂吹PCR,似乎PCR是检验的唯一方向,有的悲观,我有一个检验博士朋友,就认为只要PCR结果就不可信。我个人认为PCR合理正确的使用在检验医学有一定的价值,否则真同意朋友的观点。
  PCR用于研究遗传性疾病的比例相当的大,而用于传染性疾病研究的反而小,因此就PCR的应用而言其在遗传性疾病、肿瘤等方面的实验室诊断应用前景较大。但是只是前景,由于目前这方面成果限制,还不能用于临床。一些比较确定的检测,如唐氏综合症、地海贫等虽可以应用,但是由于临床诊断已经很容易,或由于没相应治疗手段,因而不需要精确诊断等等原因,在临床上使用不多。
  现在临床上使用PCR最多的还是诊断感染性疾病。但事实上,有很多感性疾病并不适合于PCR。一般说来,开放性的使用PCR我都不赞成,如呼吸道、消化道、阴道等分泌物及拭子。因为其高灵敏度可能性是个炸弹。例如淋病,正常镜检要在细胞内有才能报阳性,而如用PCR,胞内胞外都是阳性的。
  对于血液,由于存在病原体入血浓度及时间等问题,灵敏度更要打折扣。
  但是PCR有一个好处,就是对于未知的感染性疾病,它是最容易想到,也是最容易实现的检测技术。以SARS为例,SARS病原就是PCR找到的,最早出来的检测试剂也是PCR。同时,PCR也是最易开发的检测技术,SARS病原出来以后,全国科研、公司少说也有上百家在做PCR试剂。就检验科而言,用PCR做科研做开发也是几乎唯一可行的。因为它只要合成引物就可以,不用花什么钱。
  由于PCR检测病原是检测的病原直接证据,因此,PCR的定量对于治效监测比较理想要好于血清学指标。例如,PCR检测HBV在乙肝的诊断上要弱于两对半,但在治疗监测上要好于两对半。因此PCR要合理使用,并告之临床,这样才会不引起纠纷,体现PCR的价值。
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