SYBR Green I 是一种能与双链DNA 结合发光的荧光染料。其与双链DNA结合后， 荧光大大增强。因此， SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。SYBR Green I 的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。

 

SYBR Green I 的缺点：由于SYBR Green I没有特异性，不能识别特定的双链，只要是双链就会结合发光，对PCR反应中的非特异性扩增或引物二聚体也会产生荧光。所以在临床上使用可能会有假阳性发生。

SYBR Green I的优点：SYBR Green I的优点是因为其缺点产生，由于它能所有的双链DNA相结合，所以对不同模板不需特别定制，通用性好，并且价格相对较低。这对科研是很有利的，因此国内外在科研中使用比较普遍。

4. 荧光谐振能量传递（FRET）

　　FRET探针是罗氏的发明专利，又称双杂交探针，FRET探针由两条相邻探针组成，在一条探针的5`端标记FAM荧光基团，另一探针的3`端标记Red 640荧光基团。当复性时，探针结合在模板上，FAM基团和Red640基团相邻，激发FAM产生的荧光，作为Red640基团的激发光被吸收，使Red640发出波长为640的荧光。当变性时，探针游离，两基团距离远，不能产生640波长的荧光。由于FRET探针是靠近发光，所以检测信号是实时信号，非累积信号。常用的荧光基团是：LC-Red640，LC-Red705。

5．LUX Primers

LUX (light upon extention) 引物是利用荧光标记的引物实现定量的一项新技术。目的使用类分子信标的发夹结构设计引物，使引物同时起到荧光探针的作。引物对中的一个引物3’端用荧光报告基团标记。在没有单链模板的情况下，该引物自身配对，形成发夹结构，使荧光淬灭。在模板存在的情况下，引物与模板配对，发夹结构打开，产生荧光信号。使用LUX引物，不需要专门设计探针，即省了成本又给实验设计提供了宽松的条件。由于没有探针控制特异性，因此他的特异性要弱于探针技术，但非特异性扩增或引物二聚体没有影响，所以其特异性要强于SYBR　GREEN。

 

图.LUX 引物工作原理

SYBR　GREEN	FRET探针	Taqman	分子信标	LUX 引物
性质	可逆荧光		积累荧光
熔点分析	能		不能
特异性	引物（非特异性扩增或引物二聚体有影响）	引物＋2探针	引物＋探针	引物＋探针	引物（非特异性扩增或引物二聚体无影响）
探针	不需要	需要	需要	需要	不需要
通用性	通用	专用	专用	专用	专用