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RNA操作指南
来源:互联网 作者:未知 发布时间:2006-10-19
RNA抽提纯化是分子生物学研究的基本工作内容。但是由于RNA酶(RNase)的广泛存在和难以灭活的特性,使RNA的抽提纯化和后续工作十分困难。即使Trizol试剂和各类RNA抽提纯化试剂盒的广泛应用使RNA抽提和纯化变得方便快捷,但是涉及RNA的工作仍然是分子生物学研究中最让人棘手的。为了保证您的工作成功,请仔细阅读本操作指南,相信它能帮助您解决常见的问题。
总而言之,RNA工作顺利与否的关键是防止RNA酶的污染。RNase无处不在,在实验操作的任何一步,任何偶然的疏忽或不妥当的操作都有可能造成RNase的污染,从而导致整个实验的失败。因此,严格控制实验条件,避免任何可能的污染,是保证实验成功的先决条件。为此,必须作到以下几点:
  • 尽可能在实验室专门辟出RNA操作区,离心机、移液器、试剂等均应专用。RNA操作区应保持清洁,并定期进行除菌。
  • 操作过程中应始终戴一次性橡胶手套,并经常更换,以防止手、臂上的细菌和真菌以及人体自身分泌的RNase带入各种容器内或污染用具。尽量避免使用一次性塑料手套。塑料手套不仅常常给操作带来不便,而且塑料手套的多出部分常常将器具有RNase处传递到RNase-free处,扩大污染。
  • 尽量使用一次性的塑料制品,避免共用器具如滤纸、tips、tubes等,以防交叉污染。例如,从事RNA探针工作的研究者经常使用RNase H、T1等,在操作过程中极有可能造成移液器、离心机等的污染。而这些污染了的器具是RNA操作的大敌。
  • 配制溶液用的乙醇、异丙醇、Tris等应采用未开封的新瓶装试剂。
  • 关于一次性塑料制品,建议使用厂家供应的出厂前已经灭菌的tips和tubes等。多数厂家供应的无菌塑料制品很少有RNase污染,买来后可直接用于RNA操作。用DEPC等处理的塑料制品,往往由于二次污染而带有RNase,从而导致实验失败。
  • 所有玻璃器具都必须在150℃烘烤4小时。
  • 如果您需要长期储藏或运输RNA样品,请将您的RNA样品溶解在Sangon提供的RNApro中,它可以在常温下保证您的RNA样品在一年内不会发生降解。
无法用DEPC处理的用具可用氯仿擦拭若干次,这样通常可以消除RNase的活性。
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