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质粒提取过程中的几点注意事项
来源:http://fengdaoxiao.bokee.com/ 作者:fengdaoxiao 发布时间:2006-10-26
1.加入溶液2后不要剧烈振荡,只需轻轻颠倒几次离心管。
2.加入溶液2后,复性时间不宜过长,一般是5分钟,否则会使染色体复性。
3.在用苯酚、氯仿抽提时应用TE缓冲液将原溶液的体积扩大,一般是200~ 300 微升,以减少DNA的损失。
4,在加入酚氯仿的步骤中,最好用未高温灭菌的离心管,因为高温过程中可能使管口变形,使得振荡混匀过程中酚氯仿容易溢出。
5,溶液II不可冷冻,现用现配.
6,在加入等量的酚氯仿离心后,离心管内三层物质,从上至下依次为DNA上清液,蛋白质,酚氯仿.
7,50%的乙醇可溶解DNA,故应该极其注意70%的乙醇是否盖子完好,否则稀释的乙醇有可能将所获得DNA溶解掉.
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