DNA点杂交

l        DNA斑点印迹的制备

预备

1．冰浴中以70W左右的超声波处理基因组DNA 1min，用琼脂糖凝胶电泳检测片段大小，这些片段大小均应为7～10kb。

2．用TE缓冲液将DNA稀释至0.5μg/μl。

 

斑点印迹的制备

1．加热5μg DNA（在10μl TE缓冲液中）至95℃ 10min，冰浴5min。用微量离心管短暂离心收集液滴，置冰浴。

2．裁一张大小合适的滤膜，用铅笔在滤膜上画1cm的方格网以标记DNA点样的位置。

3．滤膜先用蒸馏水稍微浸湿，并用20×SSC使其饱和。将膜放在经20×SSC预饱和过的滤纸（Whatman 3MM）上。

4．以5μl的DNA分装样品在滤膜上点样，待前一个样品干燥后再点第二个样品。

5．将滤膜放在一张干燥的滤纸（Whatman 3MM）上稍微晾干，以5×SSC漂洗5min。

6．将DNA固定于膜上，硝酸纤维素膜需置80℃真空烤炉2h。当尼龙膜仍潮湿时，应用Saran包装膜（或任何类似的塑料薄膜）包裹，将DNA面朝下置紫外透射仪上，紫外线（280mn）照射3～5min，这时的滤膜已可用于杂交。