1.      在一个0.5 ml的薄壁微量离心管中设置下列扩增/放射性标记反应体系：

10×扩增缓冲液               5.0μl

10 mmol/L dNTP溶液          1.0μl

0.1 mmol/L dCTP              1.0μl

20μmol/L 正向寡核苷酸引物   2.5μl

20μM反向寡核苷酸引物        2.5μl

模板DNA（2～10 ng或约1 fmol）   5～10μl

10 mCi/ml[α-³²P] dCTP (比活性3000 Ci/mmol)        5.0μl

水                            加至48μl

在反应体系中加入2.5单位耐热DNA聚合酶。轻敲管壁以混合各组分。

2.      如果热循环仪无加热盖，可加一滴（50μl）轻矿物油或一粒石蜡于反应混合物之上，以防止样品在反复加热及冷却的循环中蒸发。将微量管放入热循环仪。

3.      通过变性、复性和聚合扩增样品，反应时间见下表。

4.      从热循环仪中取出反应管，用微量移液器尽可能地从反应液上层吸去矿物油。用50μl氯仿抽提反应液，以除去剩余的矿物油。室温下离心1 min以使液相与有机相分离。

5.      吸去上层水相，转移到一个清洁的微量管中，加入载体tRNA（10～100μg）或糖原（5μg），用等体积的4mol/L乙酸胺和2.5体积的乙醇沉淀DNA，放置于-20℃ 1～2 h或-70℃ 10～20 min。4℃下以最大速度离心5～10 min收集沉淀的DNA。

6.      将DNA溶于20μl TE(pH 7.6), 用Sephadex G-75离心柱层析除去残存未掺入的dNTP和寡核苷酸引物。

7.      用液体闪烁计数仪测定1.0μl离心柱外水体积的放射活性。贮存剩余的放射性标记DNA于-20℃以备用。