原核细胞
l 用IPTG诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因
含重组表达载体的大肠杆菌菌株的构建
1. PCR修饰或限制性内切酶消化分离DNA片段，片段5’端和3’端带有与IPTG诱导表达载体对应的限制酶位点。
2. 含靶cDNA/基因的DNA片段与表达载体连接。
3. 重组质粒转化有lacIq 等位基因的大肠杆菌菌株。如果质粒本身有lacI基因，可以使用任何适当的大肠杆菌菌株。将转化体铺于含氨苄（50μg/ml）的LB平板，于37℃过夜培养。
4. 通过菌落杂交和/或小量制备质粒的限制酶切分析、寡核苷酸杂交或序列分析筛选带有插入片段的转化体。
诱导靶蛋白表达的优化
许多研究表明细胞生长速率严重影响外源蛋白的表达，因此必须对接种菌量、诱导前细胞生长时间和诱导后细胞密度进行控制。生长过度或过速都会加重细菌合成系统的负担，导致形成包涵体。
5. 对照菌和重组菌分别挑取1～2个菌落，接入1 ml含氨苄青霉素（50μg/ml）的LB培养液，适当温度（20～37℃）培养过夜。
大肠杆菌在室温的生长速率比在37℃慢4倍，所以～20℃培养过夜（16 h）可能达不到饱和。但低温时细菌代谢缓慢，不容易形成包涵体。
6. 取50μl过夜培养物接入5 ml含氨苄青霉素（50μg/ml）的
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