叶绿体mRNA3’末端的体外加工

l      RNA加工反应

1．在1.5ml微量离心管中加入下列反应液：

缓冲液IVT（20×）                            0.5μl

叶绿体蛋白提取物（20μg）                      Lμl

缓冲液E                                       Mμl

（L＋M＝5μl）

DEPC处理过的水                                Xμl

H-RNA（约0.25fmol，每分钟计数2000）           Yμl

（X＋Y＝4.5μl）

以加入H－RNA起始反应，温和混匀，短暂离心使反应液从管壁上甩下来。

注：

缓冲液IVT（20×）：200 mmol/L KCl, 75 mmol/L MgCl2, 40 mmol/L二硫苏糖醇（DTT）  用DEPC处理后高压灭菌。

缓冲液E

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