荧光原位杂交的染色体分析

（一）标本的制备

1．室温下，依次用70％、90％和100％的乙醇脱水5min。

2．空气干燥载玻片。

3．若短期使用，载玻片可在室温贮存数天。若载玻片要长期保存，应在室温下过夜使组织“老化”（aged），然后放入容器中，该容器密封于含干燥剂的塑料袋内，－70℃保存。根据作者的经验，在6个月内使用的载玻片可贮存在－20℃。在杂交实验之前解冻这些载玻片，不提倡反复冻融载玻片。

（二）缺口平移法标记探针

通过缺口平移法生物素（酰）化DNA探针

1．结合：2μg探针DNA，10μl 10×反应缓冲液，10μl β－巯基乙醇，10μl核苷酸母液（含0.5mmol/L dATP, 0.5mmol/L dCTP, 0.5mmol/L dGTP, 0.5mmol/L生物素-16-dUTP和0.12mmol/L dTTP），20单位DNA聚合酶I和1：1000稀释的DNase I，加双蒸水至100μl（最后加酶）。

2．在15℃温育2h。

3．置反应混合物于冰浴直至反应产物的大小被确定。

4．凝胶电泳检测探针分子的长度：取10μl反应混合物，加入凝胶上样缓冲液，水浴箱中煮沸2～3分钟使其变性，冰浴3min，上样到1～2％的琼脂糖微型凝胶中，并以适当大小的标准品做对照，以50V/cm电泳3min。用浓度为0.5μg/ml的溴化乙锭染胶，在紫外透照仪上显示DNA并拍照。

5．对于最佳的杂交条件，探针（可见一脱尾）应为100

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