PCR－SSCP法

1）提取DNA

同前RFLP法

 

2）PCR扩增

同前PCR-RFLP，也可加入1μCi³²P-dCTP标记产物。

 

3）非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

1．取PCR的扩增产物，加凝胶加样液3μl，95℃加热变性2min，冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍，加样3μl。

2．取样品用微量加样器加入非变性聚丙烯酰胺凝胶样品孔中，200V电泳过夜。

 

4）放射自显影

1．未掺入同位素的PCR产物电泳后，取出凝胶床，撬去粘附的玻璃板，将凝胶浸在固定液中15min。

2．用0.2％ AgNO₃浸泡10min，用去离子水冲洗。

3．在显色液中显影，直到获得满意效果。将显色好的凝胶转贴到滤纸上，照相分析结果。