RFLP法

1）常规制备DNA

盐析法

1．用淋巴细胞分离液从抗凝血中分离出白细胞。

2．每3ml细胞悬液加10ml红细胞裂解液溶解红细胞两次，再加2ml白细胞裂解液溶解白细胞。

3．加50μl 10％ SDS和70μl蛋白酶K消化蛋白质，37℃过夜或55℃ 3h。

4．加0.25体积饱和醋酸钠溶液，剧烈摇动15s。

5．2000r/min离心15min，收集上清。

6．加入2.5倍预冷无水乙醇沉淀DNA，－20℃过夜。

7．吸取DNA团块用70％乙醇洗3次，每次10 000r/min，10min。再溶于适量TE缓冲液中，4℃保存。

 

酚抽提法

1．采集EDTA抗凝血0.5ml，加双蒸水2.5ml，溶解红细胞。

2．离心10 000r/min，5min，弃上清。

3．加0.5ml生理盐水，混匀，离心10 000r/min，5min，弃上清。

4．加500μl TES，混匀，再加20％ SDS 25μl

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