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地中海贫血是由组成珠蛋白的X珠蛋白链和B珠蛋白链基因突变的引起，它包括X 地中海贫血和B地中海贫血，世界疾病在我国南方各省区的发病率相当高，个别地区 可达18%，它的严重的影响人口的质量.
一、地中海贫血的临床
(一)X地中海贫血的临床:X地中海贫血在临床上可分为四 种类型①HbBarst胎儿水肿综合征②HbH病③轻型(标记型)X地中贫血及④静止型地中 海贫血.(二)B地贫在临床上亦分为四型①重型B地中海贫血，②轻型B地中海贫血③中 间型地中海贫血及④遗传性胎儿Hb持续存在症.其中第④类型较为常见.
二、地中海贫血的遗传学
(一)α地中海贫血:α地中海贫血的发生是由于α珠蛋 白链基因突变的结果，α珠蛋白是基因定位于16P16-4er)，每条染色体上均有两个α 珠蛋白基因，该基因其长30Kb其中包括有两个假基因和一个胚胎性Hb链基因，每个α 基因含有两个内含子和3个外显子总长约0.5Kb.(二)β地中海贫血:β地中海贫血由β 珠蛋白链基因突变所引起，该基因定位于11P15.5，总长度约70Kb，其中有许多胚胎性基因及假基因，而β珠蛋白基因有两个内含子和3个外显子，总长约为1.126Kb.
三、α和β珠蛋白基因的突变类型
(一)α-基因的突变:在α-基因的突变中，以 缺失型突变最为常见，其缺失的范围可从两个α-基因均缺失至一些小片段的缺失均 可在人群中检出，α-基因的另一突变即为单碱基置换，目前已发现的突变有18种以 上，它包括错义突变，无意突变剪接部位突变及起始信号突变.(二)β-基因的突变: β-基因的突变以点突变为主，即单核苷酸置换是β-基因的主要突变类型，它亦有碱基的括入和缺失，在我国检出的β-基因点突变见下表:
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位置 |
性质 |
对基因功能影响 |
类型 |
| 启动子区(TATA) |
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| -32 |
C→A |
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| -30 |
T→C |
mRNA转录效率下降 |
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| -29 |
A→G |
β链合成减少 |
β＋ |
| -28 |
A→G |
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| RNA剪接基因突变 |
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| IVS-1n＋1 |
G→T |
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| IVS-1n＋5 |
G→C |
mRNA合成异常 |
β＋ |
| IVS-13 |
T→G |
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| IVS-2n＋654 |
C→T |
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| 误义突变 |
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| CD26 |
G→A |
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正 |
| 无意突变 |
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| CDn |
A→T |
β链合成短 |
β |
| CD43 |
G→T |
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| 突变 |
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| 缺失: |
CD8―AA |
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CD31―C |
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CD41/42-TCTT |
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| 括入 |
＋40±43-AAAC |
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CD14/15＋G |
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CD27/28＋C |
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CD71/72＋T，＋A |
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| 起始裂解 |
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ATG→AGG |
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四、PCR技术在α地贫基因诊断中的应用
α地贫是由α珠蛋白基因不同范围的缺 失及点突变所致，但以缺失型突变最为常见，因此，α地贫PCR诊断的主要任务就在于快速检出α珠蛋白基因的缺失片段.
(一)α基因全部缺失(--1--)的PCR诊断
α基因全部缺失所引起的临床表现为HbBar+胎儿水肿综合征，用PCR方法检测等，其反应体系组成如下:
引物:
PC01；5'TACTGTAGATACCCGTGTACAA3'
PC02；5'ATCARGGAAACATAGTAAT3'
PC03；5'ACACAACTGTGTTACCTAGC3'
PC04；5'CAACTTCATCCACGTTCACC3'
扩增片段：αPC01-PC02；136；-
βPC03-PC04；110；110
扩增条件：93℃(30'')；45℃(30'')；65℃
检测：3%珠脂糖电泳
注):PCO3和PCO4扩增片段位于β基因，作为内对照.
结果判定:在正常人PCO1-PCO2扩增片段为B6bp，PCO3-PCO4为110bp，而HbBart胎儿水肿综合征仅有PC)3-PCO4的110扩增片段而无PCO1和PCO2的136bp扩增产物.
(二)部分α基因缺失型的PCR检测
除HbBart胎儿水肿外，在α地贫中，尚有部分α基因缺失的类型，它仍是α地贫2，α地贫HbH病，应用PCO1和PCO2时正常和缺失染色体均有扩增，因此对2，2，HbH及正常个体不能鉴别，因此又有人设计了一组新的引物体系进行α基因缺失的检测，该本系的组成及操作过程如下
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引物名称 |
序列位置 |
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S1 |
F5'GTGTTCTCAGTAT
TGGAGGGAA3' |
4 S1 3'端 |
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S2 |
F5'GACACGCTTCCA
ATACGCTTA3' |
α3'HVR 5'端 |
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S3 |
R5'CTACTGCAGCCT
TGAACTCC3' |
4α2 5'端 |
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α1 |
F5'CGGGCCTGGGCC
CTCGGCCC3' |
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R5'CCACGGGGGTAC
GGGTGCAG3' |
二者的3'端 |
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α2 |
F5'CGGCTGCGGGCC
TGGGCCGC3' |
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R5'ATTCCGGGACA
GAGAGAACC3' |
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五、PCR技术在β地贫基因诊断中的应用
β地贫的基因突变主要是单碱置换.目前在世界范围内发现的单碱基置换达160余种，其中在中国发现的有21种，由于β珠蛋白基因的突变主要为单碱基碱置换，因此其诊断途径与β地贫完全不同，其诊断的主要目的即检出点突变.
(一)检测已知突变位点
1.PCR-ASD与ROB
PCR-ASO是快速简便的检测已知β珠蛋白基因点突变的方法，主是利用PCR技术扩增靶基因的适当片段，然后用人工合成的含突变位点的标记寡核苷酸探针，逐一筛查，泛检测的反应体系包括.
引物:见下表
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引物名称 |
位置 |
序列 |
扩增片段大
小bp |
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βA |
-129--104 |
A5'GTACGGCTGTCATC
ACTTAGACCTCA3' |
A→B600 |
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βB |
编码97-89 |
B5'TGCAGCTTGTCACA
GTGCAGCTCACT3' |
C→D422 |
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βC |
EVS-2475-476 |
C5'GTGTACACATATTG
ACCAAA3' |
A→D1502 |
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βD |
编码114→108 |
D5'AGCACACAGACCA
GCACGTT3' |
41 |
点膜与杂交:PCR-ASO是将PCR扩增产物点于杂交膜上，然后与上述的ASO探针杂交，根据杂交的结果判断分析，以确定突变位点RDB以改传统的杂交途径，它是将一系列的标记ASO探针固定在膜上，然后用之与PCR扩增产物进行杂交，使检测程序大大简化.
张是增等人根据我国常见的β基因突变情况，将18种5突变分为两组，一组为常见的，另一组为非常见，与这些突变相对应的ASO探针反分为两组，将这些探针固定于膜上，再与相反的PCR扩增产物进行杂交，常用的7种ASO探针可检出98%的中国人β基因点突变同RDB方法简便，快速，使用非同项素标记的ASO探针使之节约于推广，而是探针膜条便于保存和运选.
2.等位特异PCR(ASAPCR)
ASAPCR是检测已知β基因突变优点进行β地贫基因诊断又一有效手段，有人用该方法检测Cordows41-42，TVSnt654，CD17TATA盒-28和CD71-72，这五种我国南方常见的β基因点突变诊断β地贫，完成的用于产前诊断.
3.PCR-RFLP检测引起内切酶切点改变的突变诊断β地贫.
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突变位置 |
内切酶 |
切点影响 |
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β |
MnlⅠ |
丢失 |
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CD17 |
MaeⅠ |
生成 |
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-29 |
NIaⅢ |
生成 |
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CD43 |
HinfⅠ |
消失 |
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TVS-1nt1 |
BsPMⅠ |
消失 |
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CD41-42 |
HinFZ |
酶解产物变化 |
(二)突变性质不明β地贫的诊断
在β地贫中，尚有一部分人群的基因突变性质不明，但临床表现为β地贫则可用PCR-SSCP、PCR-DGGE、PCR-TGGG进行突变片段筛查，然后对异常的片段进行快速测定，以确定突变位置性质及β地贫的关系.
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