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血友病A是常见的遗传性凝血障碍，它是由凝血因子Ⅷ的基因缺陷而致其功能异 常的致其发病率改为1/1000男性，女性患者极为少见.在临床上，血友病大都有家族 史，亦有约20～30%的患者为散发病例，为新生基因突变所致.
一、血友病的遗传学
本病为X连锁隐性遗传病，其基因定痊于Xq28.因子Ⅷ(FVⅢ)基因全长约为186Kb， 包括26个外显子和25个内含子，其mRNA全长约为9Kb，CDNA占为9009bp.其翻译产物为 2351个aa残基的多肽链.在FVⅢ基因内含有多个酶切位点，在其翻译区尚有VNTR序列 及(CA/n重复序列.
二、FVⅢ基因突变的特点
(一)大范围的缺失，重排，重复及括入仅点血友病A的5%
(二)FVⅢ基因突变的主要类型为单碱置换所引起的点突变，目前还发现的单碱是 置及在八十种以上，几乎涉及FVⅢ的所有外显子和部分内含子.
三、PCR技术在血友病A基因产前诊断中的应用
FVⅢ基因突变以点突变为主，而且有高度异质性，因此对患者的诊断10前还是主 要依据临床表现进行，在一个家系内若要进行血友病A的产前诊断，则必须用连锁分 析的方法，该方法的应用则必须满折方法有以下两种:
(一).PCR-RFLP
在因子组基因内及其复侧有多组RFLP位点可用为标记进行连锁分析进行产前诊 断，常用的PCR-RFLP位点有两种，其引物序列，酶切片段多者情况见下表.
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位点 |
引物序列 |
内切酶 |
长度 |
酶解片段 |
| Ext18 |
5'-TAAAAGCTTAAATGG TCTAGGC-3' |
BclⅠ |
142 |
99＋43 |
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5'-TTCGAATTCTGAAATT ATCTTGTTC-3' |
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| Int22 |
5'-CACGAGCTCTCCATCT GAACATG-3' |
XbaⅠ |
96.0 |
68＋28 |
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5'-GGGCTGCAGGGGGGG GGGACAACAG-3' |
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| Int19 |
5'-GGCGAGCATCTACAT GCTGGGATGAGC-3' |
HindⅢ |
717 |
469＋167＋81 |
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5'-GTCCAGAAGCCATTC CCAGGGGAGTCT-3' |
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(二)，Amp-FLP
在FVⅢ区内尚有两个VNTP区，一个位于DXS52，另一个为(CA)n位于DX102内，它 仍均具有复杂的多者性，亦可用于连锁分析，是引物及扩增产物的多者性见下表
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位置 |
引物 |
片段 |
范围 |
| DXS52 |
5'GGCATGTCATCACTTCT CTCATGTT-3' |
14 |
0.7-3.0 |
| |
5'CACCACTGCCCTCACG TCACTT-3' |
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| DX102 |
5'GTAGTCTCAGTCGACA TGCTTTGAC3' |
8 |
152± |
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5'GCTGAGAAAGTAGATC CTAAGTGTTC3' |
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(三)血友病APCR基因诊断程序
1.母亲、先证者的RFLP及Amp-FLP，确定风险染色体
2.检测胎儿性别(SRT)
3.检测胎儿的RFLP及AmP-FLP
四、散发病例FVⅢ基因突变的PCR检测
由于因子FVⅢ的基因突变以点突变为主，而且具有高度特异性，因此，单独网点 突变的检测方法仍以诊断，对于形发病例来说，可用PCR-SSCP，PCR-DGGE及其它的点 突变是筛查方法确定点突变血友病A之间的关系具有重要意义，尤其是PCR-DGGE已用 于血友病A基因点突变的筛查.
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