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色谱柱的使用和维护 |
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来源：互联网 作者：未知 发布时间：2006-12-16
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卡套柱的安装(加预柱)
1. 将卡套架1套入柱芯2
2. 将两片夹套片3嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于 柱芯2 (见左图)
3. 将已套到柱芯上的卡套架1向上推，直至高过夹套片
4. 将"子弹头"预柱放入卡套片内
5. 将卡套帽4和卡套架1旋在一起，然后用手拧紧
6. 然后依同样的顺序连接好柱子的另一端
7. 连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手
平衡色谱柱
反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10~20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。
· 硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡
如何平衡色谱柱？
· 在拿到一根新的色谱柱时，应首先用0.2ml/min的流速将色谱柱平衡过夜，然后将流速升高到1.0ml/min冲洗30分钟，以便将色谱柱的填料充分平衡至最佳状态，这样可以保证色谱柱的使用寿命，并且保证在以后的使用中，获得分析结果的重现性。
· 平衡过程中，将流速缓慢地提高
· 用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡)
色谱柱的再生
色谱柱在使用一段时间后柱效会下降，这时可以考虑对色谱柱进行再生。
进行色谱柱再生时，应使用一个廉价的泵，我们建议：最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。
表1 建议用来冲洗的溶剂体积
色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积
125-4 1.6ml 30ml
250-4 3.2ml 60ml
250-10 20ml 400ml
请根据下表选择您的再生方法：
极性固定相(如Si, NH2*, DIOL基色谱填料)的再生：
正庚烷 e 氯仿 e乙酸乙酯 e 丙酮 e乙醇e 水**
非极性固定相(如反相色谱填料RP-18,RP-8, CN等)的再生：
水 e乙腈 e 氯仿(或异丙醇) e 乙腈 e 水
0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱
注意：
*在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M的硫酸冲洗非常有效。
色谱柱的维护：
1. 使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）
2. 大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2~7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围
3. 避免流动相组成及极性的剧烈变化
4. 流动相使用前必须经脱气和过滤处理
5. 如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕将柱子冲洗干净，并保存在乙腈中
6. 压力升高是需要更换预柱的信号
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