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(一) 原理
DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50)为弱碱性阴离子交换剂。用NaOH将CL-型转变为OH-型后,可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白属于中性蛋白(等电点为PH6.85~7.5),其余均属酸性蛋白。在PH7.2~7.4的环境中,酸性蛋白均被DEAE-Sephadex A-50吸附,只有γ球蛋白不被吸附。因此,通过柱层析γ球蛋白便可在洗脱中先流出,而其他蛋白则被吸附在柱上,从而便可分离获得纯化的IgG。DEAE-sephadexA-50柱层析是离子交换层析的一种。
(二)试剂和器材
1、试剂:
(1)盐析提取的人γ球蛋白;
(2)0.5N NaOH,0.5N HCl 2M NaCl,10%NaN3;
(3)DEAE-Sephadex A-50,聚乙二醇(PEG);
(4)0.1M, PH7.4 PB(配制见盐析部分);
2、器材:
(1)层析玻璃柱(1.3×40cm),滴定铁架,自由夹,螺旋夹,尼龙纱(200目);
(2)普通冰箱,751
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