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质粒DNA的纯化
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| （一）聚乙二醇沉淀法质粒ＤＮＡ 这里介绍的方法（R.Tresman,个人通讯）已卓有成效地用于纯化碱裂解法制备的质粒ＤＮＡ。 １）将核酸溶液[上页步骤９）所得]转入15mlＣorex 管中， 再加3ml 用冰预冷的5mol/L LiCl溶液，充分混匀，用Ｓorvall SS34 转头（或与其相当的转 |
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RNA的吸印转移法（Northern blot）
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 在RNA凝胶电泳之前，先用乙二醛等变性剂处理RNA，再在适宜条件下电泳使充分变性的RNA直接吸印到硝酸纤维膜上。固定后除去变性剂，然后进行杂交。 试剂： 乙二醛：4mol/L（约为30%），经过阴阳离子交换树脂纯化，使pH为5.5～6.0 磷酸缓冲液：80mmol/L pH6.5～7.0 磷酸缓 |
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分光光度法检测RNA浓度
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 使用法玛西亚公司的DNA/RNA浓度测定仪，测定样品A260和A280值。根据A260/ A280比值，估测RNA质量。一般A260/ A280比值在1.8~2.0之间，可以满足实验要求。在100μl RNA原液中取1μl稀释至250μl（DEPC处理的水），测定样品的A260和A280的值，按下列公式计算其浓度：RNA |
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异硫氰酸胍法
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 异硫氰酸胍法提取制备模板核酸此法主要用于RNA的提取.标本为组织细胞及血清等. 1.异硫氰酸胍消化液 异硫氰酸胍4mol/L 柠檬酸钠(PH7.0)25mmol/L 十二烷基肌酸钠0.5% β-巯基乙醇0.1mol/L 2.消化方法:用50～100ul细胞悬液及血清，加等体积的异硫氰酸胍消化液振混匀 后， |
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双链DNA探针随机引物合成法
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大?⒉?俊⒈然钚砸览涤诜从χ心０濉⒁?铩?NTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'3'外切酶活性,反应 |
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氯胺T法注意事项
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| （1）放射性碘源的选用：无载体的 131 I或 125 I均可用于碘化标记，但应尽量选用新鲜的、比放射强度高的、含还原剂量少的放射性碘源。碘源的比放射强度最好50～100mCi/ml，至少也要30mCi/ml，否则加入碘源的容量要增加，随着带入碘源中含有的还原剂（为放射性碘源运输 |
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细胞培养的微生物污染排除
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 一、抗生素除菌法：用BM－1（截耳素衍生物）和BM－2（四环素衍生物）抑制支原体 1．抗生素制备：均可用PBS配成250浓缩液－20℃备用，使用浓度参考《组织培养和分子细胞学技术》117页表6－2。 2．处理：取受支原体污染的细胞，吸除培养液，加入含BM-1的1640培养液培养3 |
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酶切反应详解
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 一、 建立一个标准的酶切反应 目前大多数研究者遵循一条规则，即10个单位的内切酶可以切割1g不同来源和纯度的DNA。通常，一个50l的反应体系中，1l的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1g已纯化好的DNA。如果加入更多的酶，则可相应缩短反应时间； |
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石蜡DNA提取
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 1.取蜡块切片15-20张（8UM），置于EP管中，加入1ML的二甲苯，37度作用3小时，100003分钟，倾去二甲苯。重复3-4次，观察管壁是否光滑。若有蜡质残存，需继续脱蜡。 2.剃度酒精水化：100% 1ML，室温30分钟，100003分钟，去上清；95%；75%；50%。 3.消化：1SSC 500UL ，洗 |
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DNA片段回收与纯化
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 质粒、噬菌体等经酶切，电泳；PCR产物经电泳后，常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化，用于亚克?⑻秸氡昙堑取?NA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等，也有现成的试剂盒供应。 一、冻融法 1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条，将切下的胶条 |
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质粒DNA的碱裂解法提取与纯化
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通 |
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Northern Blots 技术
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| [仪器、试剂、材料] （一）仪器 恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。 （二）材料 总RNA样品或mRNA样品，探针模 |
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分子生物学试验方法探讨一－Northern blots 技术
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 研究RNA的方法有很多种，常用的如核酸保护性分析(NPA)、RT-PCR、Northern blots等等。而Northern blots曾经是应用得最广的技术之一，尽管其分辨率和操作简易性都不如前者，但Northern blots依然是检测、定量mRNA大小及在组织中表达水平的标准方法，既是能直接提供有关R |
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同位素技术三－－放射防护
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 放射性的来源扔天然的放射性和人工放射性两类。生活在地球上的人们经常受到这两种放射性的照射，天然放射性即木底照射是不可避免的，而人工放射性的应用产生了放射性危害，因而引起放射性防护问题。 一、放射性的危害必及防护的必要性 随着放射同位素的广泛应用，越来 |
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同位素技术四－－放射性测量
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 放射性同位素发出的射线与物质相互作用，会直接或间接地产生电离和激发等效应，利用这些效应，可以探测放射性的存在、放射性同位素的性质和强度。用来记录各种射线的数目，测量射线强度，分析射线能量的仪器统称为探测器（probe）。测量射线有各种不同的仪器和方法，正 |
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