常用的分子生物学基本技术简介
日期：2006-08-06 23:39:45
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核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适
色谱分析法基本原理
日期：2006-08-06 23:39:45
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?? 色谱法，又称层析法。根据其分离原理，有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等方法。 ?? ??吸附色谱是利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂或气体洗脱，以使组分分离。常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。 ?? ??分配色谱是利
用CaCl2处理制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞
日期：2006-08-06 23:39:45
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1 从37℃培养16～20h的新鲜平板中挑取一个单菌落（如大肠杆菌DH52），或1ml新鲜的16～20h过夜培养物，转到一个含有100mlLB培养基的1L或500ml培养瓶中。 于37℃振摇培养约2～3h（旋转摇床200～300r/min），每隔20～30min测量OD600值≈0.4。 2．在无菌条件下将细菌转移到
体外转录合成siRNAs
日期：2006-08-06 23:39:45
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体外转录合成siRNAs，其成本相对化学合成法比较低，是一种相对性价比高的筛选siRNAs的好方法，而且要比化学合成法更快的得到siRNAs。一旦得到DNA 双链模版（这个还是需要DNA合成的，不过DNA合成的成本就比较低了），只要24小时转染，不需要等很久。在体外构建双链RNA时
组织DNA的制备
日期：2006-08-06 23:39:45
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（1）将200mg组织在冰浴条件下用消毒剪刀充分剪碎，加4ml 1×RSB缓冲液（10mmol/L Tris, pH7.4;10mmol/l NaCl;25mmol/L EDTA,pH7.4）放入10ml带盖的塑料管中。 （2）加SDS至浓度为1%（可加0.4ml10%SDS），混匀。由于DNA从核中释放出来，样品变得粘稠。 （3）加10mg/ml
乳过氧化物酶法（LPO）
日期：2006-08-06 23:39:45
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本法反应温和，对抗原、抗体免疫活性影响小，已被广泛应用。缺点是标记率较低，一般为20～40%。 1．原理此法是利用乳过氧化物酶（Lactoperoxidase）有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用，生成125I+，并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。 2．方法以标记蛋白质抗原为例
光敏生物素核酸探针原位杂交组化程序
日期：2006-08-06 23:39:45
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（1）石蜡切片脱蜡入水后，置0.1mol/l PBS pH7.2冲洗5min；冰冻切片直接入PBS冲洗5min。 （2）0.1mol/l 甘氨酸PBS冲洗5min。 （3）0.4%Trition X-100 PBS 冲洗15min。 （4）蛋白酶K1g/ml（0.1mol/l Tris HCl pH8.0, 50mmol/L EDTA配）37℃保温30min。 （5）4%多聚甲醛P
重组质粒的提取
日期：2006-08-06 23:39:45
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质粒提取过程参照E.Z.N.A Plasmid Extraction Kit进行。 （1）用无菌牙签挑取平板上白色单菌落(5~10个)分别接种至3-5ml LB培养液(Amp+)中,200rpm培养14~16小时； （2）室温下，10,000g离心1分钟收菌； （3）加入溶液I 250l，涡旋重悬菌体； （4）加入溶液II 250l，温和
同位素技术二－－同位素示踪法
日期：2006-08-06 23:39:45
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同位素示踪法（isotopic tracer method）是利用放射性核素作为示踪剂对研究对象进行标记的微量分析方法，示踪实验的创建者是Hevesy。Hevesy于1923年首先用天然放射性212Pb研究铅盐在豆科植物内的分布和转移。继后Jolit和Curie于1934年发现了人工放射性，以及其后生产方
PCR-SSCP技术
日期：2006-08-06 23:39:45
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随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现。尤其是PCR技术问世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展。如不对称PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性片段长度多态性分析(Restrict
蛋白复性（三）-蛋白质的结构转换
日期：2006-08-06 23:39:45
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摘要 许多不相关的蛋白质含有相同的短肽序列却形成不同的空间构象. 结构转换广泛存在于蛋白质折叠和功能过程中, 具有重要的生物学意义. 综述了Serpin和EF-Tu的失活、血细胞凝集素的激活、蛋白酶成熟、亚基装配和蛋白质淀粉样化等过程中肽链同源肽段的结构转换模式, 并
优化基因表达的关键因素
日期：2006-08-06 23:39:45
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在基因表达研究中，研究者比较注意选择合适的表达载体和宿主系统，而往往忽视基因本身是否与载体和宿主系统为最佳匹配这样一个实质性问题。基因的最佳化表达可以通过对基因的重新设计和合成来实现，如消除稀有密码子而利用最佳化密码子，二级结构最小化，调整GC含量等
蛋白芯片的基本原理及技术研究现状
日期：2006-08-06 23:39:45
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随着分子生物学芯片技术研究工作的进一步深入开展，NDA芯片技术已经被逐渐应用于对生物样品中的各种已知或未知的核酸序列表达的检测和比较研究。但是，作为生物体细胞中实施化学反应功能成分的蛋白质，其相当部分与活性基因所表达的mRNA之间未能显示出直接的关系，因此
核酸基础数据
日期：2006-08-06 23:39:45
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一个DNA碱基对（钠盐）的平均分子量 = 650 道尔顿 1.0 A 260 unit ds DNA = 50 g/ml = 0.15 mM (in nucleotides) 1.0 A 260 unit ss DNA = 33 g/ml = 0.10 mM (in nucleotides) 1.0 A 260 unit ss RNA = 40 g/ml = 0.11 mM (in nucleotides) 双链DNA分子的分子量(道尔
凝胶层析技术
日期：2006-08-06 23:39:45
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凝胶层析又称为分子筛层析或凝胶过滤。具有分子筛作用的物质很多，如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶应用最广，商品名是sephadex型号很多，从G 10 到G 200 ，它的主要应用范围是：①分级分离各种抗原与抗体；②去掉复合物中的小
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