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气相色谱层析技术
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| （一）基本原理 混合样品的气流通过固定相时，根据各组分对固定相的吸附强弱不同使不同成分得到分离。 利用气相色谱层析技术做为微生物诊断的工具已成功地用于微生物的分类和鉴定。该法敏感性强，能够分离和检测到毫微克的水平。它具有快速的特点，常在数十分钟甚至数 |
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簿层层析
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上，形成一薄层进行层析时一即称薄层层析。其原理与柱层析基本相似。 1．薄层层析的特点：薄层层析在应用与操作方面的特点与柱层析的比较。 2．吸附剂的选择：薄层层析用的吸附剂 |
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PCR 引物设计的原则和要点
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 引物设计有 3 条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发 DNA 聚合反应 ( 即错配 ) 。引物设计应注意如下要点： 1 引物的长度一般为 15-30 bp ，常用的是 18-27 bp ，但不应 |
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鸟枪法（Shotgun)的基本步骤
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| (1) 目的基因组DNA片段的制备 基本原则：DNA片段之间存在部分重叠序列；DNA片段大小均一。 分离和纯化真核生物基因组DNA时，通常采用蛋白酶分解和有机相抽提的方法除掉蛋白质及脂类等其他大分子。基因组DNA片段化则主要采用物理剪切法和限制性内切酶法。 (2)外源DNA片 |
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化学合成siRNA
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 在较早的哺乳动物 RNAi 实验中， siRNAs 是通过化学方法合成的，就像合成引物一样， 是应用起来最方便的一种方法，研究人员几乎不需要做什么工作。但是 RNA合成成本高，定制周期长，特别是有特殊需求的RNA序列。由于价格比其他方法高出很多， 而且设计好的 siRNAs 中通 |
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样品RNA的分离与纯化
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 含10 6 个细胞液加等量纯化溶液[4mol/L胍基硫氰酸盐，25mmol/L柠檬酸pH7.0，0.5％肌氨酸（sarcosyl），0.1mol/l 2-巯基乙醇]。总体积为细胞沉淀4-5倍，混匀。加0.1体积2ml/L乙酸钠（pH4.1），1体积酚（重蒸水上封），0.2体积CIAA，混匀器剧烈混合10秒钟。冰水浴15分钟 |
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双链DNA探针切口平移法
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连接到切口的3'羟基末端。同时该酶具有从5'→3'的核酸外切酶活性,能从切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同时又在切口的3'端补上核苷酸,从而使切口沿着DNA链移动,用放射性核苷酸代替原先无放 |
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Southern杂交
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤: (1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。 (2) 将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼龙膜)上。 (3) 预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性位点。 ( |
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Iodogen碘化法
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 1．原理 用Iodogen为氧化剂，对蛋白质和多肽抗原进行碘化标记，把125I直接引进分子中的酪氨酸残基上。标记过程中被标记样品不与Iodogen混合，标记后取出样品即停止反应，不使用任何还原剂。 2．方法 （1）标记之前，先把Iodogen溶于有机溶剂，涂于管底，并使之干燥。 |
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酰化试剂（Bolton和Hunter试剂）法
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 1．原理 用酰化剂3--（4-羟苯基）丙酸N琥珀酰胺酯（BoltonHunter试剂）做连接试剂，将 125 I标记在羟苯基的2，5位置上，再将琥珀酰胺酯水解，通过一个酰氨键将3--（4羟基5 125 I苯基）接在蛋白或多肽的末端氨基上。 2．方法 125 IBoltonHunter试剂可用氯胺T法自行制备 |
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MinElute DNA纯化技术
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 作分子生物学实验，核酸纯化、酶切、克隆算是最基本的步骤了。因为要做定向克隆，通常要作双酶切。为了省时省事儿，我们常常想方设法把两个酶放在一起切。可是事情并非总那么称心如意两个酶经常在一起闹别扭，不是反应温度不同啦，就是Buffer不同，有时候两个酶切位点 |
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RFLP和RAPD技术
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 第一节 概 述 DNA分子水平上的多态性检测技术是进行基因组研究的基??FLP(Restriction Fragment Length Polymorphism,限制片段长度多态性)已被广泛用于基因组遗传图谱构建、基因定位以及生物进化和分类的研究。RFLP是根据不同品种（个体）基因组的限制性内切酶的酶切 |
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同位素技术一－－概 述
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 一、放射性同位素的特点 众所周知，放射性同位素（radiosotlope）是不稳定的，它会变。放射性同位 素的原子核很不稳定，会不间断地、自发地放射出射线，直至变成另一种稳定同位 素，这就是所谓核衰变。放射性同位素在进行核衰变的时候，可放射出射线、 射线、射线和电子 |
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甲醇酵母表达系统
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日期：2006-08-06 23:39:45
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| 甲醇酵母基因表达系统是一种最近发展迅速的外源蛋白质生产系统。甲醇酵母是可利用甲醇作为唯一碳源的酵母，主要有 H.Polymorpha、Candida Bodinii、Pichia Pastoris 三种，其中 Pichia Pastoris 作为基因表达系统使用得最多、最广泛 ［1］ 。与以往的基因表达系统相比 |
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