实验题目：图像采集与分析技术
教    师：XXX

实验类型：基本技术
学　　时：6 (参考)

内　　容：

一、仪器设备   凝胶成像分析系统 ChemiGenius2

二、仪器结构
 

三、原　　理

样品在电泳凝胶或者其他载体上的迁移率不一样，以标准品或者其他的替代标准品相比较就会对未知样品作一个定性分析。这个就是图像分析系统定性的基础。根据未知样品在图谱中的位置可以对其作定性分析，就可以确定它的成份和性质。

样品对投射或者反射光有部分的吸收，从而照相所得到的图像上面的样品条带的光密度就会有差异。光密度于样品的浓度或者质量成线性关系。根据未知样品的光密度，通过于已知浓度的样品条带的光密度指相比较就可以得到未知样品的浓度或者质量。这就是图像分析系统定量的基础。

采用最新技术的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均匀，最大限度的消除了光密度不均造成的对结果的影响。

 

四、适用范围

1．蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析。

2．可以确定生物分子的分子量。

3．可以应用于生物分子的定量分析中。

五、操作步骤

1．打开凝胶成像系统开关。

2．打开电脑，系统自动打开并进入GeneSnap软件。

3．打开凝胶成像系统前面板，选择使用紫外透射光源或者白光透射光源，将相应光源安放到位。

4．将样品放置在透射光源的样品台上。

5．在GeneSnap操作界面里面选择使用Upper white光源，点击绿色（即时成像）按钮。
6．根据右侧成像窗口中显示的即时照片，手动调节凝胶在样品台上的位置，直至成像窗口中凝胶在照片的中央位置，关上凝胶成像系统的前面板。

7．选择紫外光源： 
No Light                      不使用灯照射，直接成像

Transilluminator        紫外透射光源

Epi long wave uv       长波紫外反射光源（365nm）

Epi long wave uv       短波紫外反射光源（254nm）

Upper white           顶部白色反射光源

Lower white           底部白色透射光源

8．E.D.R.及N.F.的选择： E.D.R.       动态范围扩展，可以使照片由12 位变为16位，更加清晰

                         N.F.        中间部分区域校正，可以消除背景光分布不均造成的影响

9．选择照相时所使用的灵敏度：
                             High resolution         高分辨率

                             Medium sensitivity       中灵敏度

                             High sensitivity          高灵敏度

                             Max sensitivity          最高灵敏度

10．选择使用的滤光片：
                             No Filter    适用于可见光、荧光和化学发光物质的照相

                             EtBr/UV   适用于紫外光照相

11．点击绿色（即时成像）按钮，按钮变为红色，成像窗口出现即时照片。

12． 调整照相机光圈大小，使看到的凝胶照片亮度正合适。

13． 调整图片放大/缩小倍数，使所照凝胶所成的照片大小与成像窗口大小相适应。

14．调整照相机的焦距，使凝胶所成的照片最清晰。

15． 设置曝光时间，使所成的照片清晰、亮度适中。

16． 点击红色按钮，冻结图像并且在成像窗口中显示（freeze image as current view in image window）。

17．调整预览照片的亮度（Reset brightness），使照片明亮清楚。

18．调整预览照片的对比度（Reset contrast），使照片上的图案更加。

19．调整预览照片的灰度（Reset gamma），使照片更加清晰。

20．把各个参数都调节到最佳之后，保存照片。 Toggle false color view Show saturation

 

六、注意事项

1．紫外凝胶照相时要防止EB污染仪器，在紫外透射灯样品台上垫上蓝色和白色胶片，开关凝胶成像系统前面板那、操作GeneSnap软件之时都不可以戴手套。白光透射光源放置在紫外透射光源上面时要把蓝色和白色胶片取出。

2．注意开机顺序，先开凝胶成像系统，再打开电脑进入GeneSnap软件。

3．在使用紫外光源照相的过程中，不可以打开凝胶成像系统前面板。

 

七、思考题

1．关于仪器使用和维护应该有哪些注意事项？

2．通过哪些方面的调整可以使我们采集到的照片的质量更好？

3．如果透射光源分布不均会对分析结果产生什么影响？

4．通过哪些手段可以使我们定量分析的结果更准确？