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DNA的Feulgen反应
来源:互联网 作者:未知 发布时间:2006-09-15
实验题目:DNAFeulgen反应
   师:XXX                       
实验类型:基础
    时: 4(参考)
    容:
一、实验目的
Feulgen 反应是专一性染DNA的反应,是经典的细胞化学方法,通过实验使学生掌握Feulgen染色的技术。
二、实验原理
    DNA经弱酸(1mol/LHCL)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生,是由于反应产物的分子内含有醌基,醌基是一个发色团,所以具有颜色。对照组预先用热三氯醋酸或DNA酶处理,抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应,从而证明了Feulgen反应的专一性。
三、试剂与器材
 1.材料 Carnoy液固定的鼠肝石蜡切片 Carnoy液固定的洋葱根尖或蚕豆根尖切片
 2.试剂 Carnoy固定液 1mol/LHCL Schiff试剂  亚硫酸水溶液 5%三氯乙酸 0.5%固绿酒精溶液
 3.实验器材 显微镜 载片 盖片 刀片 吸水纸镜头纸 恒温水浴锅 剪刀 表面皿 凹面载玻片
四、实验内容
兔肝石蜡切片(洋葱根尖石蜡切片)→脱蜡→复水→1mol/L HCl水解(60℃)→Schiff试剂染色避光→分色→亮绿复染→显微镜下观察  
五、关键步骤及注意事项
1. Schift试剂的配置;掌握好HCl水解的时间;Schift试剂染色时注意遮光。
六、思考题
1. 说明Feulgen 反应中设立的对照组的必要性。
2. 简图表示Feulgen 反应的染色结果。
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