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实验题目：细胞器的分离与鉴定
教 师：XXX
实验类型：综合
学 时：4(参考)
内 容
一、实验目的
了解细胞器分离的基本原理，掌握操作方法
二、实验原理
组织经过匀浆化后，放在均匀的悬浮介质上，即可用差速离心法分离其亚细胞组分。
球形颗粒在均匀的悬浮介质中的沉降速度取决于离心场G、颗粒的密度、半径以及悬浮介质的粘度。
细胞器分离常用介质是缓冲的蔗糖水溶液。它比较近细胞质的分散相，具有足够渗透压，防止颗粒膨胀破裂，对酶活性干扰小，在pH7.4的条件下细胞器不易发生聚集。
三、试剂与器材
1.材料 大鼠肝脏
2.试剂 生理盐水 0.25mol/L蔗糖—0.01mol/LTris-盐酸缓冲液（pH7.4） 0.34mol/L蔗糖—0.01mol/LTris-盐酸缓冲液（pH7.4） 0.34mol/L蔗糖—0.05mol/LMg（AC）2（pH7.4） 0.88mol/L蔗糖—0.05mol/LMg（AC）2（pH7.4） RSB溶液 1%Janus green B溶液 甲基绿-派洛宁染液 Carnoy固定液 丙酮 蔗糖溶液 酸性磷酸酶显示用液 酸性磷酸酶作用液 葡萄糖-6-磷酸酶显示试剂
3.实验器材 解剖刀剪 漏斗 玻璃匀浆器 尼龙织物温度计 离心管 冷冻高速离心机 显微镜载片盖片 刀片 吸水纸 镜头纸 恒温水浴锅 冰箱恒温培养箱
四、实验内容
取动物肝脏→匀浆→差速离心→分离细胞核→收集质膜→细胞核纯化→分离线粒体→分离溶酶体→分离物鉴定。
五、关键步骤及注意事项
1. 注意掌握差速离心的时间和速度，注意低温操作，匀浆时充分破碎组织时间不宜过长。
六、思考题
1.差速离心与密度剃梯度离心方法有什么不同？离心结束时亚细胞组分在
介质中各呈什么样的分布？因而收集组分的方法有什么分别？
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