实验题目：大豆肽的分离纯化及活性测定
教   师：XXX

实验类型：设计
学　　时：50(参考)

内　　容：

一、实验目的
（1）掌握蛋白质的分级提取和制备丙酮干粉的技术；

（2）学习Folin-酚法测定蛋白质浓度的原理和方法；

（3）掌握标准曲线的制作方法和注意事项；

（4）掌握分光光度计的原理、使用方法和注意事项

（5）学习微量凯氏定氮法的原理和操作技术

（6）通过双向纸层析，测定大豆蛋白的氨基酸组成，掌握分离层析的原理、氨基酸纸上层析法的操作技术（包括点样、平衡、展层、显色、鉴定及定量）。

二、实验原理  
大豆中含有丰富的蛋白质、根据其性质不同，可以分为水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白、碱溶蛋白。将豆粉依次用上述溶剂提取，并用有机溶剂沉淀，可制得各部分蛋白质的干粉。

三、试剂与器材 
分析天平、分光光度计、离心机、恒温水浴、真空干燥器、 凯氏烧瓶、改良式凯氏蒸馏仪、锥形瓶、微量滴定管、水解管、鼓风恒温箱、水浴锅、吹风机、玻璃喷雾器、层析缸等。

① 对大豆粉进行水、碱两步提取；

② 制作Folin-酚法测定蛋白浓度的标准曲线；

③ 测定两步提取液的蛋白浓度（Folin-酚法）；

④ 将提取的大豆蛋白制成丙酮干粉。

⑤ 用微量凯氏定氮法测定提取的大豆蛋白质含量：

样品→消化→蒸馏→滴定→计算

⑥ 双向纸层析测定大豆蛋白的氨基酸组成：

样品处理（水解）→点样→酸性层析液中展层→碱性层析液中展层→显色→ 定性鉴定。

① 提取蛋白等电点沉淀时pH值的调节。

② Folin甲、乙试剂的使用条件和干扰因素；

③ 小心加样，切勿使样品沾污凯氏烧瓶口部、颈部。

④ 消化时，需斜放凯氏烧瓶（45^o），火力先小后大，避免黑色消化物溅到瓶口、瓶颈壁上，以致影响测定结果。

⑤ 蒸馏时，切忌火力不稳，否则将发生倒吸现象。 

⑥ 样品水解温度保持105度，使样品水解完全。

⑦ 层析液中的酸或碱的含量必须足够，而且在展层前必须用酸性层析液和氨水分别进行饱和，以防止层析滤纸上酸碱度不足的现象。

1、采用Folin的酚法测定样品的蛋白质含量时，样品中的什么物质对测定结果有干扰？