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实验题目：维生素B2和维生素C的含量测定
教 师：XXX
实验类型：综合
学 时：8(参考)
内 容：
一、实验目的
了解和掌握荧光分光光度计的使用方法
二、实验原理
测Vc 的实验原理：抗坏血酸在氧化剂存在下，被氧化成脱氢抗坏血酸，氧化型的抗坏血酸与邻苯二胺作用生成荧光化合物(脱氢抗坏血酸对－氮杂萘)，此荧光化合物的激发波长是350nm，荧光波长在430nm，其荧光强度与抗坏血酸含量成正比，样品的荧光强度与抗坏血酸标准样品荧光强度相比较，即可计算出样品中抗坏血酸的含量。
测VB2的实验原理 :维生素B2（核黄素）在468nm紫外光激发下产生荧光，在一定范围内，其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸钠还原成无荧光物质，通过测定样品在加入连二亚硫酸钠前后两次的荧光强度差值，计算样品中核黄素的含量 。
三、试剂与器材
荧光分光光度计、组织捣碎机、离心机、电子天平、烧杯、试纸、磷酸—冰醋酸溶液、抗坏血酸标准溶液、活性炭处理、pH4.6醋酸－醋酸钠缓冲液、VB2标准储备液、连二亚硫酸钠、 0.1mol/L HCl。
四、操作方法
① Vc测定：称样→加偏磷酸-冰醋酸→匀浆→样品、标样加活性炭→过滤→处理→加邻苯二胺→测定
② VB2测定：称样→加盐酸→匀浆→样品、标样加醋酸-醋酸钠缓冲液→过滤→测定→加连二亚硫酸钠→测定
五、关键步骤与注意事项
1、加入的活性炭要适量；
2、邻苯二胺盐酸盐溶液在空气中颜色变暗，影响显色，现用现配；
3、由于抗坏血酸和核黄素遇光分解，所以整个操作过程应避光；
六、思考题
1、荧光是怎样产生的荧光产生的条件有哪些
2、怎样选择测定样品的激发波长和发射波长
3、荧光分光光度计测定荧光强度与哪些条件有密切关系
4、荧光法测定维生素C、B2的关键步骤是什么
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