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实验题目:多糖的分离纯化、分子修饰及生物活性的研究 教 师:XXX
实验类型:设计 学 时:50(含量)
内 容:
一、实验目的 采用复合酶法及热水法提取百合多糖, 并对得到的多糖进行抗氧
化活性的比较研究
二、实验原理 百合多糖溶于水,不溶于醇,即水溶醇沉。再用seveg试剂除去蛋白。
三、试剂与器材
药用百合、纤维素酶R-10(5000-10000U/g)、果胶酶5000U/g、胰酶、Sephadex G-75、紫外、可见分光光度计、荧光分光光度计、高速冷冻离心机、部分收集器。
四、操作方法
1、用热水法提取百合多糖(LBPs)。
2、用复合酶法提取百合多糖。
3、比较百合多糖的提取率
4、检测多糖的生物活性。
(1)对O2-·的抑制作用。
(2)对·OH的抑制作用。
(3)对H2O2诱导的人血红细胞氧化溶血的抑制作用
(4)对人红细胞膜脂质过氧化的抑制作用
5、用Sephadex G-75对粗多糖进行纯化。。
五、关键步骤与注意事项
1、热水法提取多糖需严格控制温度、时间和加水比。
2、复合酶法提取百合多糖时需严格控制加酶量、pH、温度和时间。
3、检测抗氧化活性时需注意各种条件的影响。
4、百合多糖的纯化时需考虑柱的长度和直径,
六、思考题
1、热水法及复合酶法提取百合多糖(LBPs)的最佳条件各是什么?
2、如何提高百合多糖的提取率?
3、试比较两种方法提取百合多糖的抗氧化活性。
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