|
实验题目：细胞因子检测技术
教 师：XXX
实验类型：基础
学 时：8 (参考)
内 容：
一、实验目的：
1.以检测IL－2为例，使学生掌握一定的细胞培养技术。
2.使学生掌握一定的细胞因子检测的一些主要方法。
3.掌握免疫细胞分离的主要技术和方法。
二、实验原理：
检测细胞因子对于阐明机体免疫应答机制及相关疾病的发生、发展规律和临床治疗都有重要意义。细胞因子的检测主要分为免疫学、生物学和分子生物学三种检测方法。
生物学方法检测细胞因子活性，其原理时根据细胞因子对特定的依赖性细胞株（即靶细胞）的促增值作用，以增值细胞中的DNA合成或者酶活性作为指标，间接推算出细胞因子的生物学活性。
三、试剂与器材：
10％FCS－RPMI－1640培养液，刀豆蛋白A（ConA），3H－TdR，C57BL小鼠，IL－2标准品，PHA。
离心机、超净台、分光光度仪、细胞培养板等。
四、操作方法：
1.人外周血T细胞PBMC分离
2.PHA刺激产生IL－2
3.离心去沉淀回收上清
4.IL－2活性测定
5.CTLL－2细胞株培养
6.MTT掺入
7.测OD值570nm
8.结果分析
五、关键步骤与注意事项：
1.CTLL－2细胞存活率应大于95％。
2.因标本中含IL－4等，可影响TL－2的测定，最好采用抗IL－4 mAb吸附剂出去IL－4。
3.整个操作过程中应该注意无菌操作。
4.细胞培养时要做复孔并设阴、阳性对照。
六、思考题：
1.诱导产生IL－2时需要注意哪些方面？
2.IL－4会对IL－2的测定产生影响，应如何消除？
3.PHA诱导产生IL－2的机理是什么？
|
收藏
推荐
评论(0条)
