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一、实验目的：
1、学习基因组DNA分离技术，制备小鼠基因组DNA模板。
2、学习PCR技术的基本原理、一般方法，利用PCR技术扩增小鼠SRY等基因中的特定HMG-box保守序列。
3、设计SRY等基因的引物。
4、提高学生实验素质，培养学生学研究和创造性能力。
二、实验要求：
1、对电泳图谱进行显微摄影、并打印出照片。
2、确定小白鼠有无SRY基因。
3、分析成功或失败的原因。
三、实验条件
1、仪器：
PCR仪、电泳装置、紫外观察仪、恒温水浴锅、玻璃匀浆器 、常规试验用品。
2、试剂
（1）模板DNA制备需要的：细胞裂解液，PBS（pH=7.0），10mg/ml蛋白酶K，7.5M乙酸铵，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，100%乙醇、70%乙醇，4mg/ml核糖核酸酶，TE缓冲液（pH=7.6）。
（2）PCR扩增需要的：10x Amplification buffer，dNTP (20 mM pH 8.0)，Thermostable DNA polymerase，Forward primer (20 µM) in H2O，Reverse primer (20 µM) in H2O，Template DNA.
（3）PCR产物的初步电泳检测需要的：1XTAE电泳缓冲液，10mg/ml EB，琼脂糖，10XDNA loading buffer，
3、试验材料
本次试验以小白鼠为试验材料。
引物1根据小白鼠SRY基因HMG-box设计。产物220bp。
引物2为小鼠ZFY/ZFX基因引物，产物：447-445bp，作阳性对照用。
四、实验说明：
1、实验原理：
A、PCR技术的基本原理
B、琼脂糖电泳
2、实验方案、步骤由同学自己设计：
A、基因组DNA的提取
B、小白鼠SRY基因中HMG-box的PCR扩增
C、PCR扩增产物的琼脂糖电泳检测
D、写出实验报告。
五、注意事项
乙酸铵，酚:氯仿:异戊醇有潜在危险，使用时要谨慎
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