|
 |
染色体制片程序
|
| |
日期：2006-08-09 00:48:20
点击：39 评论：0
|
|
|
|
基因组DNA提取方法
|
| |
日期：2006-08-08 00:50:12
点击：129 评论：0
|
| 1，贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。 2，细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。 3，重复2。 4，加入5ml DNA提取缓冲液，(10m mol/L Tris-cl, 0.1 mol/L EDTA, o.5% SDS),混匀。 5，加入25ul 蛋白酶K ,使终浓度达到100ug/ml, 混匀，50℃水浴3h, 6，用等体积的酚抽提一 |
|
|
流式细胞仪检测细胞凋亡――Annexin V/PI双染色法
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：59 评论：0
|
| 基本原理 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布 |
|
|
流式细胞仪检测细胞凋亡――PI单染色法
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：47 评论：0
|
| 基本原理 其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面： 1. 细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造 |
|
|
流式细胞仪检测细胞凋亡――Heochst 33342/PI双染色法
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：21 评论：0
|
| 基本原理 经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降。细胞一经固定就不再是活细胞，而且细胞固定过程对细胞膜的通透性也有影响。因此发展了用细胞活性鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法。这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色，且染料的浓度要比固定细胞 |
|
|
细胞凋亡的几种检测方法
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：17 评论：0
|
| 一、形态学观察方法 1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有出芽现象。 2、丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及 |
|
|
MTT检测细胞生长
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：15 评论：0
|
| 1．取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含210 4 ～1010 4 靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％ CO 2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步） 2．用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子标准 |
|
|
MTT测定CMC
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：14 评论：0
|
| 1． Fen细胞培养于含10％小牛血清的RPMI-1640培养液中，在25cm 2 培养瓶中生长到接近汇合。用含0.05％胰蛋白酶，0.02％ EDTA的PBS消化细胞5分钟，洗涤后，用细胞培养液将细胞配成110 5 /ml。 2． 取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml细胞悬液，在37℃ 5％ CO 2 的饱和水汽二 |
|
|
细胞生长的ATP检测
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：8 评论：0
|
| 1．ATP反应液（Bio-Orbit）是粉末状混合物，含有荧光素、荧光素酶、0.5mmol醋酸镁、50mg BSA和0.1mol无机焦磷酸。在4℃可以保存1个月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸缓冲液稀释。稀释液分装后可在－20℃长期保存。 2．在已经完成促增殖或抑生长 |
|
|
4小时51Cr释放法检测CMC活性
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：8 评论：0
|
| 一、用 51 Cr 铬酸钠标记靶细胞 短期标记法 1．用RPMI-1640培养液洗涤10 7 靶细胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入100Ci（3.7MBq） 51 Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。 2．如上用RPMI-1640培养液洗涤细胞3 |
|
|
肿瘤细胞培养成纤维细胞排除法
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：7 评论：0
|
| 1．机械刮除法： 是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头（用胶塞剪成三角形插以不锈钢丝）、或裹少许脱脂棉制成，装入试管中高压灭菌后备用（也可用特制电热烧灼器刮除）。刮除程序为： （1）标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位； （2）刮除： |
|
|
巨噬细胞培养
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：7 评论：0
|
| 1．实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。 2．引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70％酒精中3～5秒。 3．置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。 4．再用70％酒精擦洗腹膜壁后，用 |
|
|
神经组织细胞培养
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：6 评论：0
|
| 1．获取脑组织后，先仔细剥除脑膜和血管等纤维成分，置入Hanks液中漂洗1～2次后，置于30～50倍的Hanks液中，脑组织比较柔软，反复吹打即可制成细胞悬液。 2．为排除脂肪成分和其它碎块，把悬液注入离心管中，在室温直立5～10分钟后，细胞或细胞团块自然下沉，脂肪等杂 |
|
|
MTS检测细胞生长
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：5 评论：0
|
| 1．培养IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞或HT-2细胞（检测IL-2），或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5.12细胞（检测IL-3）到对数生长期。 2．取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml含110 4 ～210 4 上述细胞之一的DMEM培养液（加10％小牛血清）。 3．每孔加0.1ml系列稀释的待测细胞因 |
|
|
肌组织细胞培养
|
| |
日期：2006-08-06 20:50:30
点击：4 评论：0
|
| 骨骼肌细胞培养 1． 杀死动物，无菌取大腿肌组织，切成 0.3 ～ 0.5 厘米小块。 2． 用不含钙镁离子的 Hanks 液配的 0.25 ％胰蛋白酶消化，无菌纱网或纱布滤过，合成培养基加 10 ％小牛血清培养，为促进分化可加 1 ％的胎汁。 3． 细胞接种量为 2 10 6 / 皿，接种在胶原 |
|
|
 |
|
本月推荐文档 |
|
|
| |
|
|
相关分类 |
|
|
|
|
|
