【摘要】  目的  观察EB病毒BLLF1基因转基因小鼠淋巴瘤的发病特征、组织病理学的特点及遗传稳定性。方法  用BLLF1基因制备了转基因小鼠，对其中2只MA表达阳性的发生淋巴瘤的鼠进行繁育并观察淋巴瘤的特征及遗传稳定性。结果  转基因鼠淋巴瘤的发病部位与人类发病部位相似，但出现顺序有不同，发病的性别差异与人类不同，经16代传代，淋巴瘤仍能稳定遗传。结论  该小鼠模型有可能成为探讨淋巴瘤发病机制的动物模型。

    【关键词】  EB病毒  淋巴瘤  转基因小鼠  遗传

    Phenotype study of lymphoma in EBV BLLF1 gene transgenic mice

       【Abstract】  Objective   To observe the pathogenic and histopathologic characteristics of lymphoma in EBV BLLF1 gene transgenic mice.Methods  We constructed transgenic mouse with EBV BLLF1 gene which codes for membrane antigen (MA) and found that two of the four lines that expressed  MA had the phenotype of lymphoma at the age of 4 month and 8 month old respectively. Analysis of pathology and immunologic phenotype of the lymphoma shows that it is T-cell lymphoma. Results  The  relationship between EBV BLLF1 gene and lymphoma for the first time，suggesting the expression of BLLF1 gene may lead to lymphoma. Here we provide the results of further study on the characteristics of lymphoma phenotype and the stability of lymphoma after breeding. Conclusion  The results show that after 16 passages， the phenotype of lymphoma is obvious and stable. 

    【Key words】  EB virus  lymphoma  transgenic mouse  heredity

    EB病毒（Epstein-Barr Virus ， EBV）在人群中的感染很普遍，流行病学调查以及临床病例研究发现EB病毒感染和人类若干种免疫系统的肿瘤密切相关，如地方性Burkitt’s淋巴瘤、Hodkin’s淋巴瘤及Non-Hodkin’s淋巴瘤［1］。

    近年来用转基因小鼠技术研究EB病毒和淋巴瘤的关系取得了一定成绩，英国Glasgow大学的Wilson JB（1996）用EB病毒核蛋白（nuclear antigen，NA）基因制备了转基因小鼠并发现其表达可引起淋巴瘤［2］。美国North Carolina 大学的Kulwichit W用EB病毒潜伏膜蛋白（latent membrane protein， LMP）基因制备了转基因小鼠，发现该基因的表达亦可引起淋巴瘤［3］。这是EB病毒与淋巴瘤关系研究上的重要突破。EB病毒感染后可表达9种蛋白，如LMP 和NA在潜伏感染时表达，膜蛋白在病毒活化感染时表达。膜蛋白在病毒感染宿主细胞时发挥重要作用，即膜蛋白可作为配体结合于宿主细胞膜的受体上从而介导病毒感染。为了探讨EB 病毒膜抗原（membrane antigen， MA）BLLF1 基因在致病中的作用，我们用BLLF1基因制备了转基因小鼠，共获得4个独立的转基因鼠系。对4只首建鼠进行了观察，发现2只MA表达阳性的鼠系发生淋巴瘤［4］。本文在此基础上对转基因小鼠进行了繁育并观察了淋巴瘤的发病特征及遗传稳定性。结果显示，荷瘤小鼠经16代繁殖淋巴瘤表型能稳定遗传。

    1  材料和方法

    1.1  转基因小鼠  EB病毒膜抗原BLLF1基因转基因小鼠为本室繁殖。繁殖方法采用荷瘤雌、雄鼠互交。

    1.2  组织病理学检查  瘤组织用10%中性甲醛固定24h，常规石腊包埋、切片，片厚4μm。HE 染色、镜检。

    2  结果

    2.1  淋巴瘤发病特征

    2.1.1  发病部位  分析患淋巴瘤的小鼠19只，其好发部位为淋巴结，一般是腹股沟淋巴结先肿大，然后发展至腋下淋巴结、颌下淋巴结，其次为脾脏、肝脏。胸腺未见发病。淋巴瘤表型见图1。

    2.1.2  发病鼠龄  经传代发现最小发病鼠龄为20天，最大鼠龄8个月。见图2、3。

    2.1.3  发病性别差异  我们观察的一组有明显淋巴瘤表型的小鼠19只，其中雌性15只，雄性4只，其性别比例是3.75：1. 雌性发病比例明显高于雄性。

    2.1.4  生育能力  荷瘤小鼠可生育，但生育能力下降，每胎子鼠在6只以下，子鼠可夭亡。见图4。

    2.2  组织病理学  淋巴瘤镜下特点：瘤细胞中等大小，大小相对一致，胞浆少，透亮或淀粉染。胞核呈圆形、椭圆形或不规则形，并可见散在分布的大的异形细胞。可见多个较清楚核仁，核分裂像多见。见图5。

    3  讨论

    本研究观察了EB病毒膜抗原BLLF1基因转基因小鼠淋巴瘤的发病及病理特征。淋巴瘤好发部位为淋巴结，其次为脾脏、肝脏，与人的淋巴瘤发病部位类似。但人的淋巴瘤常首先出现在颈部淋巴结，而小鼠则首先出现在腹股沟淋巴结，且腹股沟淋巴结肿大明显。

    雌、雄小鼠发病的性别比例为3.75：1，表明雌性小鼠发病比例较高。这一结果与人群中淋巴瘤的发病男、女性别比例不一致。人群中男性发病比例略高于女性［5］。目前我们尚不能解释这一差异是否由于人的淋巴瘤发病与社会因素有关。在人群中同胞中不同胎次的儿童发病可不同；生活水平不同的人群发病率可不同；城市与农村发病率亦不同。EB病毒BLLF1基因转基因小鼠淋巴瘤发病的性别差异为我们研究性激素在发病中的作用创造了条件。

    有关发病年龄的观察，我们发现发病最小鼠龄为20天，最大鼠龄为8个月。

    淋巴瘤组织病理特征为：瘤细胞中等大小，大小相对一致，胞浆少，透亮或淀粉染。胞核圆形、椭圆形或不规则形，并可见散在分布的大的异形细胞。可见多个较清楚核仁，核分裂像多见。

    EB病毒BLLF1基因转基因小鼠淋巴瘤表型经传代能稳定遗传，因此我们可利用这一模型来研究EB病毒BLLF1基因的表达与淋巴瘤的关系。该小鼠模型有可能成为探讨淋巴瘤发病机制的动物模型。有关这方面的研究正在进行之中。

    【参考文献】

    1  Epstein MA，Achong BG. In “The Epstein-Barr Virus”(M.A.Epstein and B.G.Achong， Eds).Springer-Berlin， Heidelberg and New York，1979，1-22.
    2  Wilson JB，Bell JL Levine AJ， et al. Expression of Epstein-Barr virus nuclear antigen-1 induces B cell neoplasia in transgenic mice. EMBO J，1996， 15(12):3117-3126.
    3  Kulwichit W， Edwards RH， Davenport EM ，et al. Expression of the Epstein-Barr virus latent membrane protein 1 induces B cell lymphoma in transgenic mice. Proc Natl Acad Sci USA，1998，95(20):11963-11968.
    4  郭长占，周为民，潘秀芳，等.EB病毒膜抗原BLLF1基因转基因小鼠的制备.基础医学与临床， 1999， 19(4): 30-32.
    5  Alexander FE，Mckinney PA， Williams J，et al.Epidemiological evidence for the two-disease hypothesis in Hodgkin’s disease.Int J Epidemiol，1991，20:354.